時(shí)間：2023-03-13 11:09:33
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1.1 超級細(xì)菌
2010 年《柳葉刀》雜志首次報(bào)道南亞的 “超級細(xì)菌”，該菌攜帶具有泛耐藥性 NDM-1 基因，能對絕大多數(shù)抗生素耐藥；經(jīng)進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，英國衛(wèi)生部和美國疾控中心均提出攜帶 NDM-1 基因的細(xì)菌具有大范圍傳播和感染能力。目前，NDM-1 耐藥菌在印度腸細(xì)菌感染中達(dá) 1%-3%；在歐洲、非洲和澳大利亞等地亦已有報(bào)道；我國在 2011 年首次發(fā)現(xiàn)該類耐藥細(xì)菌，可見其感染范圍和感染率呈擴(kuò)增趨勢。耐藥性不改變致病菌的性狀，但可讓患者在感染后變得無藥可治。臨床微生物學(xué)傳統(tǒng)定義的“超級細(xì)菌”包括臨床上出現(xiàn)的多種耐藥菌，如耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（MRSA）、抗萬古霉素腸球菌（VRE）以及耐多藥肺炎鏈球菌（MDRSP）等。與 NDM-1 耐藥菌相比，這些傳統(tǒng)的“超級細(xì)菌”檢出率更高，在感染性疾病中更多見；其中，MRSA 是醫(yī)院內(nèi)最常見的病原菌之一，具有高發(fā)病率。據(jù)美國 CDC 統(tǒng)計(jì)，每年約數(shù)十萬人因感染 MRSA 而住院治療，院內(nèi)感染的 MRSA 分離率已高達(dá) 80%以上，其多重耐藥的特性不但增加了治療的復(fù)雜性和難度，也增加了抗生素的消耗量和醫(yī)療費(fèi)用。
1.2 耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（MRSA）
金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）是主要的食源性微生物，由其引起的食品中毒事件在革蘭氏陽性菌中高居首位；據(jù)統(tǒng)計(jì)，在美國，由金葡菌引起的食物中毒占 33%，僅次于大腸桿菌；在 1983-1997 年間，每年約 18.5 萬人發(fā)生葡萄球菌中毒，其中 1750 人住院，總醫(yī)療費(fèi)用達(dá) 15 億美元。金葡菌在加拿大占細(xì)菌性食物中毒的 45%，而在某些歐洲國家如匈牙利、芬蘭等則占 50%以上。在日本，1980-1999 年間共超過2500 起葡萄球菌中毒報(bào)道，受感染人數(shù)約 6 萬人；而 2000 年因污染金葡菌引起的“雪印奶粉”事件則超過 14000人受感染。在我國，每年由金黃色葡萄球菌引起的食物中毒事件也是屢見不鮮。金葡菌也是典型的耐藥微生物，是潛在的“超級細(xì)菌”。1961 年 Jevons 在英國首次發(fā)現(xiàn)對甲氧西林耐藥的金葡菌（MRSA），MRSA 在 20 世紀(jì) 60 年代中期擴(kuò)展至歐洲及北美等地區(qū)，逐漸成為世界范圍內(nèi)的主要醫(yī)院獲得性病原體；在 70 年代末急劇增多并遍及全球，其引起的感染性疾病與乙型肝炎，艾滋病同為當(dāng)今世界三大感染頑疾[15,16,19,20]。；而從 90 年代開始，MRSA 更突破了以往在醫(yī)院中檢出的局限，進(jìn)一步在社區(qū)中被大量檢出，其菌株與耐藥特點(diǎn)也隨之發(fā)生變化。
1.3 MRSA的耐藥性
MRSA 從首次發(fā)現(xiàn)至今 50 余年中，其耐藥范圍不斷擴(kuò)大，耐藥程度也日益嚴(yán)重。上世紀(jì) 80 年代，慶大霉素是一般治療 MRSA 感染的有效藥物，而目前 MRSA 對其耐藥率已超過 50%；同期，MRSA 對曾經(jīng)的保留用藥氟喹諾酮類藥物高度敏感，但當(dāng)前 80%以上的 MRSA 對其耐藥。研究發(fā)現(xiàn)，MRSA 耐藥的主要原因是其攜帶的 mecA 基因編碼的一種對 β-內(nèi)酰胺類抗菌藥物具低親和力的青霉素結(jié)合蛋白 PBP2a；mecA 是一個(gè)外源基因，來自凝固酶陰性葡萄球菌或腸球菌屬，通過轉(zhuǎn)座子或 R 質(zhì)粒轉(zhuǎn)到原本敏感的金葡菌中，并整合在染色體第 10 節(jié)段上，該基因組島被稱為葡萄球菌染色體盒（SCCmec）。PBP2a 蛋白分子量為 78kD，當(dāng)金葡菌固有的 PBPs 被 β-內(nèi)酰胺類抗菌藥物結(jié)合失活后，PBP2a 能替代其發(fā)揮轉(zhuǎn)肽酶的功能，促進(jìn)細(xì)胞壁合成，從而產(chǎn)生耐藥性[22]。根據(jù)美國臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)（NCCLS）標(biāo)準(zhǔn)，金葡菌在檢出 mecA 基因或者 PBP2a蛋白時(shí)即可定義為 MRSA；但菌株的耐藥程度有所差異，其主要包括兩大類：相對敏感型菌株和高度耐藥型菌株。在培養(yǎng)基鑒定菌株耐藥時(shí)，為克服表型的異質(zhì)性，傳統(tǒng)方法采用不易降解，MRSA 異質(zhì)性相對較低的苯唑西林，通過適當(dāng)培養(yǎng)條件如在 30℃或 35℃培養(yǎng)，提高培養(yǎng)基 NaCl 濃度 ( 2 %～4 %)，強(qiáng)化耐藥性表達(dá)，延長培養(yǎng)時(shí)間，來提高準(zhǔn)確性[24]。近年來，新型耐藥整合子元件在 MRSA 中大量發(fā)現(xiàn)，成為 MRSA 耐藥性發(fā)展的新特點(diǎn)。整合子是一種存在于細(xì)菌質(zhì)?；蛉旧w上具有移動(dòng)性的基因捕獲和表達(dá)的遺傳單位，在革蘭氏陰性菌中被廣泛報(bào)道，介導(dǎo)對多種抗生素的耐藥性，成為革蘭氏陰性菌中耐藥性泛濫的主要原因[25-28]。然而在革蘭氏陽性菌中一直鮮有報(bào)道。筆者根據(jù)對 2001 年-2006 年間華南地區(qū)的 MRSA 耐藥性研究表明[5,6,29-32]，第一類整合子在 MRSA 中普遍存在，但分離率低于常見報(bào)道的革蘭氏陰性菌，為 46.6%（122/262），遠(yuǎn)低于常見院內(nèi)感染微生物如銅綠假單胞菌（一般報(bào)道為 80%以上）等；同時(shí)，前期研究顯示，第一類整合子系統(tǒng)存在與否，對紅霉素、慶大霉素、四環(huán)素和甲氧芐啶-磺胺甲唑等抗生素的耐藥性具有顯著影響。然而，這些抗生素均具有較長的歷史，并非治療 MRSA 感染的常用藥物，甚至多年前已退出醫(yī)院常用藥物行列。例如，四環(huán)素自 1948 年問世至今超過 60 年，是應(yīng)用最多、最廣泛的廣譜抗菌素；后來發(fā)現(xiàn)其對牙齒、指甲與鞏膜等具有嚴(yán)重副作用，隨后在臨床使用中逐漸淘汰。慶大霉素同樣由于具有較大副作用在多年前已退出治療的一線藥物。因此，近年來流行MRSA 中出現(xiàn)的對這些抗生素耐藥性可能不由臨床環(huán)境中抗生素選擇壓力所產(chǎn)生?？赡苡捎谶@些藥物在畜牧業(yè)中仍被大量應(yīng)用，因此在 MRSA 中出現(xiàn)的對這些藥物的耐藥性，這也暗示了畜牧業(yè)中抗生素的濫用造成了微生物在向“超級細(xì)菌”進(jìn)化，這已經(jīng)成為食品安全中的一個(gè)重要的潛在問題。
2 MRSA的檢測
常規(guī)方法對 MRSA 的檢測包括：苯唑西林紙片擴(kuò)散法，乳膠凝集試驗(yàn)和苯唑西林瓊脂篩選方法。最近，臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化研究所（CLSI）推薦使用的頭孢西丁紙片擴(kuò)散法檢測 MRSA[33]，以及還有一些其他的檢測方法。常規(guī)培養(yǎng)液檢測方法通常具有很高靈敏度，但是對于此方法高的靈敏度伴隨的是檢測速度相對比較慢。
2.1 紙片擴(kuò)散法
紙片擴(kuò)散法包括苯唑西林和頭孢西丁紙片擴(kuò)散法，其步驟一般包括制備菌液、接種平板、貼藥敏紙片、培養(yǎng)等。前者把菌株在 1μg 苯唑西林 MH 瓊脂培養(yǎng)基進(jìn)行試驗(yàn)，抑菌圈在 35℃經(jīng)過 24 小時(shí)培養(yǎng)確定；其抑菌圈大小是根據(jù) CLSI（2008）的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行判斷:抑菌環(huán)直徑≤10 mm 為耐藥，11-12 mm 為中介，≥13 mm 為敏感；當(dāng)抑菌圈直徑在 11～12 mm 時(shí)判斷為中間，需加做 mecA 或 PBP2a 的檢測以證實(shí)是否為 MRSA。該方法最大優(yōu)點(diǎn)是快速、簡便、價(jià)格便宜，易被檢驗(yàn)人員接受。在合適的抗生素、pH、及培養(yǎng)溫度、菌液的濃度、培養(yǎng)基厚度等條件下，該方法檢測 MRSA 是可行的。它對 MRSA 檢出敏感性、特異性較高，仍不失為目前臨床微生物實(shí)驗(yàn)室常規(guī)篩檢 MRSA 方法之一。但由于多種因素的影響，從表型上進(jìn)行診斷，其結(jié)果略欠準(zhǔn)確，致使其特異性低于其他方法。許多研究均發(fā)現(xiàn)頭孢西丁紙片法相比于苯唑西林紙片法具有更好的靈敏度[34-36]。該法把菌株在帶有 30μg 的苯唑西林 MH 瓊脂培養(yǎng)基進(jìn)行試驗(yàn)，抑菌圈是 35℃經(jīng)過 16-18 小時(shí)培養(yǎng)確定：根據(jù)CLSI（2008）標(biāo)準(zhǔn)：抑菌環(huán)直徑≤21 mm 為耐藥，≥22 mm 為敏感。該方法優(yōu)點(diǎn)同樣是快速、簡便、價(jià)格便宜，并且靈敏度高于苯唑西林紙片法。Priya Datta[32]等發(fā)現(xiàn)，頭孢西丁的紙片法具有 98.5％的靈敏度和 100%的特異性，而苯唑西林紙片法的是 91.4%的靈敏度和 99.2%的特異性。但是作為 CLSI 所推薦的標(biāo)準(zhǔn)，在檢測 MRSA時(shí)如果與一些其它方法補(bǔ)充可以不會(huì)有 MRSA 的漏檢。苯唑西林紙片擴(kuò)散法對于 MRSA 異質(zhì)性耐藥檢測較為困難，而頭孢西丁能誘導(dǎo) mecA 基因表達(dá) PBP2a，能更好地檢出異質(zhì)性耐藥菌株。
2.2 苯唑西林瓊脂篩選
MH 培養(yǎng)基加 NaCl(40 g/L)加苯唑西林(6 μg/ml)，將菌液(0.5 麥?zhǔn)蠞岫?畫線在培養(yǎng)皿上 35°C 培養(yǎng) 24 h，只要平皿有菌生長，即使是一個(gè)菌落也判斷為 MRSA，敏感度為 100%。與常規(guī)方法相比在 MRSA 檢測上并無顯著性，但對于其它葡萄球菌，瓊脂篩選法有較高的陽性率，因此尤其適用于多種葡萄球菌中 MRSA 的檢測。該法操作方法簡便、實(shí)驗(yàn)成本低，一個(gè)平板可同時(shí)檢測多個(gè)樣品，檢出率高，較為實(shí)用，可用于 MRSA的常規(guī)檢測；尤其當(dāng)多種檢測方法結(jié)果不一致時(shí)，應(yīng)以瓊脂篩選為準(zhǔn)。但是該法耗時(shí)長，此外 Swenso 等發(fā)現(xiàn)在異質(zhì)耐藥菌株進(jìn)行試驗(yàn)時(shí)該方法敏感性下降，特異性降低且出現(xiàn)邊緣性MIC；Diedere等發(fā)現(xiàn)CHROM瓊脂篩選具有 97.1%的敏感性和 99.2%的特異性，如果篩選周期到由 24 小時(shí)變?yōu)?48 小時(shí)，菌落敏感性將會(huì)增加到 100%。
2.3 乳膠凝集試驗(yàn)
凝集試驗(yàn)是一種快速、操作簡便的免疫學(xué)診斷方法，在臨床快速 MRSA 診斷方面應(yīng)用廣泛。其原理是抗 PBP2a 單克隆抗體致敏的乳膠顆粒與 MRSA 的膜蛋白提取物作用，如產(chǎn)生肉眼可見的凝集顆粒證實(shí)有PBP2a 存在，判斷其為 MRSA。其它還有一些檢測存在于細(xì)胞膜內(nèi) PBP2a 的乳膠試劑，這類檢測需要裂解細(xì)胞。代表的試劑盒包括 PBP2’Test（Oxoid）、MASTALEX -MRSA（Mast）和 MRSAScreen（Denka Seiken）。研究表明該方法的敏感性≥97%[41-43]，而 Datta 等[36]報(bào)道其具有 100%的敏感性和 99.2%的特異性。同時(shí)，該方法具有與 mecA 基因檢測相關(guān)性好、快速簡便、特異性強(qiáng)、靈敏度高等特點(diǎn)，且不需特殊儀器和技術(shù)，尤其適合用于 MRSA 早期檢測，可作為 PCR 法的替代方法；但檢測成本較高。
2.4 分子生物學(xué)診斷方法
自上世紀(jì)90年代起，分子生物學(xué)方法在微生物檢測中逐漸取代傳統(tǒng)方法，主要包括PCR、熒光定量PCR與各種新型核酸擴(kuò)增技術(shù)等。與常規(guī)“金標(biāo)準(zhǔn)”方法相比，PCR技術(shù)具有較大優(yōu)勢。首先，在耗時(shí)方面，由于常規(guī)方法基于細(xì)菌培養(yǎng)，因此增菌以及選擇性培養(yǎng)耗時(shí)可長達(dá)3天，但PCR由于檢出限低，樣品中微量的菌體足以啟動(dòng)擴(kuò)增反應(yīng)，因此在從樣品處理到培養(yǎng)的時(shí)間可大為縮減。由于PCR具有高特異性，因此以上方法的增菌與細(xì)菌培養(yǎng)（LB培養(yǎng)基）階段，與“金標(biāo)準(zhǔn)”相比，耗時(shí)可降低12-24h。其次，細(xì)菌鑒定操作方面，“金標(biāo)準(zhǔn)”方法在細(xì)菌培養(yǎng)后，常需通過血漿凝固酶實(shí)驗(yàn)鑒定，而PCR通過選取特異的分子靶點(diǎn)，結(jié)果特異性高；該方法在鑒定金葡菌特異基因的同時(shí)，以所有葡萄球菌的靶點(diǎn)為內(nèi)參，可信度更高。
再次，PCR方法的高靈敏度和特異性，有助于解決“金標(biāo)準(zhǔn)”方法中假陰性和低敏感度的問題。筆者等以orfX為檢測靶點(diǎn)，建立針對MRSA的檢測方法，該方法已被證明是一個(gè)簡單，快速，特異，敏感的檢測方法，對于食品檢測，醫(yī)院等機(jī)構(gòu)對MRSA快速鑒定具有重要意義，在未來發(fā)展中對簡化檢測方法的改進(jìn)具有深遠(yuǎn)的意義。此外，筆者等[44]建立的多重PCR體系，針對16SrRNA、femA和mecA基因，可用于MRSA檢測。除具有常規(guī)PCR的優(yōu)點(diǎn)外，多重PCR能在同一次PCR反應(yīng)和凝膠電泳分析中，完成多個(gè)靶基因的檢測，在簡便性、耗時(shí)方面具有較大優(yōu)勢；本實(shí)驗(yàn)建立的多重PCR方法，結(jié)果證實(shí)其能對葡萄球菌、金葡菌及關(guān)鍵耐藥因子進(jìn)行檢測與鑒定。該方法特異靈敏、簡便快捷，同時(shí)具有適應(yīng)面廣，易于推廣和應(yīng)用等優(yōu)點(diǎn)。1995年出現(xiàn)的以標(biāo)記特異性熒光探針為特點(diǎn)的熒光定量PCR技術(shù)，實(shí)行完全閉管式操作，不僅能大大減少擴(kuò)增產(chǎn)物的污染機(jī)會(huì)，提高檢測的特異性，且可通過計(jì)算機(jī)自動(dòng)分析對擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行精確定量提高檢測的靈敏度，完全克服了普通PCR的缺點(diǎn)，且該方法操作簡便迅速，適用于大樣本量的篩查該方法可用于檢測葡萄球菌及腸毒素。與傳統(tǒng)的培養(yǎng)檢測技術(shù)相比，分子檢測技術(shù)能夠?qū)κ称分杏泻ξ⑸飳?shí)現(xiàn)快速、準(zhǔn)確的檢測；與普通的PCR相比，實(shí)時(shí)熒光定量PCR可以在PCR反應(yīng)過程中直接檢測熒光信號，無需配膠、電泳等步驟，可以更加快速有效地鑒別出MRSA，且可以對靶位基因進(jìn)行定量檢測。Warren等[45]通過特定目標(biāo)的一種熒光分子信標(biāo)探針與擴(kuò)增產(chǎn)物雜交，用實(shí)時(shí)熒光PCR法直接從鼻咽拭子標(biāo)本中快速檢測MRSA，其敏感性為91.7％，特異性為93.5％，82.5％能顯示陽性，97.1％能顯示陰性，其中拭樣處理和檢測時(shí)間僅為1.5小時(shí)。
Oh等通過Xpert MRSA檢測體系，在2小時(shí)內(nèi)完成MRSA檢測；Xpert MRSA測試法是一種快速，敏感，臨床上有用的檢測方法，利用SCCmec上一段特異性序列，特別適用于早期MRSA的檢測。Liu等[47]通過使用一種新的集成微流體系統(tǒng)可以檢測活MRSA、敏感金葡菌和其它病原體，該微流體系統(tǒng)已被證明具有100％的MRSA檢測特異性；從樣品預(yù)處理到熒光觀察，可自動(dòng)化在2.5小時(shí)內(nèi)完成。Stenholm等[48]用一種即時(shí)檢測的雙光子激發(fā)熒光檢測技術(shù)對243株MRSA進(jìn)行檢測，其中99.0％的MRSA真陽性樣品所需時(shí)間小于14小時(shí)，該法主要優(yōu)點(diǎn)包括簡單的檢測程序，試劑消耗低，以及高流量能力。近年來有多重新型核酸技術(shù)被報(bào)道，其中環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增（LAMP）技術(shù)是在2000年由Notomi等發(fā)明的一種體外等溫?cái)U(kuò)增特異核酸片段的技術(shù)[49,50]。自問世以來，數(shù)年間已被廣泛應(yīng)用于生物安全、疾病診斷、食品分析及環(huán)境監(jiān)測等領(lǐng)域。該方法在簡便、快速、特異性和靈敏度方面具有顯著優(yōu)勢。LAMP反應(yīng)的靈敏度也極高，其靈敏度可達(dá)常規(guī)PCR的10-100倍（檢出限是常規(guī)PCR的1/100～1/10拷貝數(shù)）。因此，對細(xì)菌進(jìn)行檢測時(shí)LAMP法在培養(yǎng)時(shí)間和所需基因拷貝數(shù)等方面具有較大優(yōu)勢。筆者曾過對118株葡萄球菌進(jìn)行16SrRNA、femA和mecA三個(gè)特異性靶點(diǎn)的LAMP檢測[3]，其中，16SrRNA-LAMP均檢測為陽性，靈敏度與陽性預(yù)測值均為100%；而PCR則只檢測其中113株葡萄球菌陽性，靈敏度與陽性預(yù)測值分別為95.8%與100%。對65株金葡菌和53株凝固酶陰性葡萄球菌，femA-LAMP的靈敏度、陽性預(yù)測值與陰性預(yù)測值分別為98.5%、100%與98.1%；而PCR則相應(yīng)為92.3%、100%與91.4%。對70株甲氧西林耐藥菌和48株敏感菌，mecA-LAMP的靈敏度、陽性預(yù)測值與陰性預(yù)測值分別為94.3%、100%與92.3%；而PCR則分別為87.1%、100%與84.2%。同時(shí)，筆者利用MRSA中的特異靶點(diǎn)orfX，建立一種針對MRSA的快速檢測技術(shù)。通過對116株對照菌株進(jìn)行驗(yàn)證，顯示該技術(shù)的特異性為100%，能有效針對MRSA進(jìn)行特異檢測。應(yīng)用該技術(shù)檢測667株葡萄球菌，包括566株MRSA、25株MSSA、53株MRCNS與23株MSCNS，結(jié)果顯示，靈敏度達(dá)98.4%（557/566），而與之平行對比的PCR技術(shù)則僅為91.7%（519/566），陽性預(yù)測值與陰性預(yù)測值分別為100%和92.7%[51]。此外，筆者利用金葡菌中的特異femA基因，建立一種針對金葡菌的LAMP快速檢測體系。通過應(yīng)用于432株金葡菌（118株臨床與314株食源性菌株）的檢測鑒定，結(jié)果顯示，檢出率為98.4%，檢出限為100 fg DNA/Tube與104CFU/ml[52]。
3 結(jié)論
1．1環(huán)境安全知識缺乏大學(xué)生對實(shí)驗(yàn)室安全的認(rèn)知率較低，調(diào)查表明物理性安全認(rèn)知率為28．9%、化學(xué)性安全認(rèn)知率為47．6%，對生物性安全認(rèn)知率僅為13．6%，而全部都知道僅為0．9%［5］。50%以上的學(xué)生對實(shí)驗(yàn)室生物安全防護(hù)的概念、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的生物危害因素、職業(yè)暴露后的處理等問題不了解［6］。對急救常識和用電常識知之甚少，對實(shí)驗(yàn)室配備的滅火器不會(huì)使用。
1．2實(shí)驗(yàn)過程中個(gè)人防護(hù)不到位學(xué)生到實(shí)驗(yàn)室后，書包到處亂放，不穿工作服，甚至于吃東西、喝水。有一些學(xué)生不注意實(shí)驗(yàn)動(dòng)物操作技術(shù)，覺得實(shí)驗(yàn)動(dòng)物好玩，對實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行撫摸;或在實(shí)驗(yàn)中抓持實(shí)驗(yàn)動(dòng)物方法不規(guī)范，出現(xiàn)被動(dòng)物抓傷、咬傷的現(xiàn)象;對動(dòng)物產(chǎn)生的分泌物、排泄物，如尿液、糞便等，不能及時(shí)、規(guī)范處理，增加受感染的機(jī)會(huì)。
1．3化學(xué)試劑及其廢棄物管理不善在管理過程中對有毒有害、危險(xiǎn)化學(xué)品、易制毒化學(xué)品存放和管理不當(dāng)，容易引發(fā)事故。由于動(dòng)物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室化學(xué)品數(shù)量眾多、品種繁雜、性質(zhì)各異，在儲(chǔ)存和使用過程中潛在著極大危險(xiǎn)性，稍有疏忽，就容易造成失火、爆炸、中毒、環(huán)境污染等事故，危及師生的生命及財(cái)產(chǎn)安全［7］。在試驗(yàn)后化學(xué)試劑類廢棄物沒有分類儲(chǔ)存，存在隨意丟棄或倒入下水道或扔到垃圾箱的現(xiàn)象，可能造成對環(huán)境的污染。
1．4實(shí)驗(yàn)動(dòng)物、組織以及受感染物品處理不規(guī)范動(dòng)物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室與其他普通實(shí)驗(yàn)室很大的區(qū)別就是要經(jīng)常、大量使用動(dòng)物、動(dòng)物尸體和組織，甚至于是含有病原菌的動(dòng)物和組織，而這些動(dòng)物尸體和組織可能使與它接觸的一次性手套、注射器、針頭等物品受到污染。這些廢棄物處理不當(dāng)，會(huì)給周圍環(huán)境以及師生健康帶來很大的威脅。
2實(shí)驗(yàn)室環(huán)境安全管理措施
2．1規(guī)范實(shí)驗(yàn)室管理制度為了保證實(shí)驗(yàn)室工作質(zhì)量和環(huán)境安全，使實(shí)驗(yàn)室管理管理有章可循，實(shí)驗(yàn)室安全規(guī)章制度的建立是安全管理實(shí)施過程必不可少的。我校教學(xué)實(shí)驗(yàn)室環(huán)境管理體系于2006年11月30日取得了ISO14001環(huán)境質(zhì)量體系認(rèn)證證書，2012年12月我院教學(xué)實(shí)驗(yàn)室現(xiàn)通過了國家級動(dòng)物實(shí)驗(yàn)教學(xué)示范中心的驗(yàn)收。學(xué)院以ISO14001環(huán)境質(zhì)量體系為標(biāo)準(zhǔn)，以國家級動(dòng)物實(shí)驗(yàn)教學(xué)示范中心的驗(yàn)收為契機(jī)，根據(jù)自身學(xué)科的特點(diǎn)和實(shí)際情況制定一系列適合運(yùn)行管理記錄和文件［9］。日常管理方面建立健全實(shí)驗(yàn)室各種記錄和日志制度;儀器方面包括核查登記表、儀器的維修、使用借還等記錄;試劑使用方面包括有毒有害化學(xué)品、易致毒化學(xué)品、麻醉品等的保管、領(lǐng)用記錄，廢棄物處理方面，包括危險(xiǎn)化學(xué)廢棄物的回收處置記錄、動(dòng)物尸體組織的儲(chǔ)存和處理記錄、一次性實(shí)驗(yàn)用品的處置記錄等。并將一部分制度上墻或上臺明示，做到有章可循、有法可依，建立實(shí)驗(yàn)室安全管理制度，更有利于加強(qiáng)日常管理。
2．2加強(qiáng)安全教育安全教育是對學(xué)生進(jìn)行安全知識的講解、安全政策的宣傳、安全案例的警示、安全措施的認(rèn)識和理解，使學(xué)生從思想上予以重視，提高執(zhí)行政策的自覺性，提高安全防范的主動(dòng)性，防患于未然的過程［10］。中心每年分別對全體教工、研究生和本科生舉辦為期3d的安全培訓(xùn)，培訓(xùn)內(nèi)容包括動(dòng)物生物安全知識、實(shí)驗(yàn)室化學(xué)品安全使用及防護(hù)、實(shí)驗(yàn)室安全防火等內(nèi)容。取得培訓(xùn)合格證后，憑合格證進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室。
2．3規(guī)范實(shí)驗(yàn)室操作規(guī)范實(shí)驗(yàn)室管理會(huì)大大提高實(shí)驗(yàn)人員的工作效率和實(shí)驗(yàn)過程的可控性，保障實(shí)驗(yàn)操作人員的健康安全，對培養(yǎng)學(xué)生嚴(yán)謹(jǐn)?shù)目蒲芯?、嫻熟的?shí)驗(yàn)操作和良好的實(shí)驗(yàn)室安全意識非常必要，同時(shí)這也是實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制的保障［12-13］。第一次試驗(yàn)時(shí)首先對學(xué)生進(jìn)行課程規(guī)范操作和注意事項(xiàng)培訓(xùn)，在實(shí)驗(yàn)過程中將產(chǎn)生的化學(xué)廢棄物按要求分類倒入不同的廢液桶，杜絕順手倒進(jìn)水池;對產(chǎn)生的感染性動(dòng)物廢料分別放入不同的特制塑料袋，在塑料袋外面貼上標(biāo)簽，標(biāo)明組織名稱，實(shí)驗(yàn)名稱等信息，由實(shí)驗(yàn)室管理處回收處理。給每個(gè)學(xué)生配備口罩、一次性乳膠手套等防護(hù)用品。規(guī)范動(dòng)物實(shí)驗(yàn)操作技術(shù)，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)操作時(shí)盡量做到動(dòng)作輕柔，小心操作，避免因抓取不當(dāng)被動(dòng)物抓傷、咬傷、撓傷，掌握常用實(shí)驗(yàn)器械的使用方法，避免被實(shí)驗(yàn)器械損傷等現(xiàn)象發(fā)生。
2．4加強(qiáng)實(shí)驗(yàn)室安全管理力度動(dòng)物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)中心在實(shí)驗(yàn)室安全管理工作中，加強(qiáng)崗位責(zé)任制。理順管理體制、明確管理職能、落實(shí)安全責(zé)任制。中心建立了院系一級的安全管理體制，行政副院長為第一責(zé)任人。中心主任、副主任、實(shí)驗(yàn)技術(shù)人員逐級簽訂“實(shí)驗(yàn)室安全管理責(zé)任書”，并結(jié)合ISO14001文件化的質(zhì)量管理體系，做到“誰主管、誰負(fù)責(zé)”、“誰管理、誰負(fù)責(zé)”、“責(zé)任到人，每個(gè)實(shí)驗(yàn)員有自己的安全管理責(zé)任區(qū)，直接管理本區(qū)域的安全工作”使環(huán)境管理從部分參與逐步轉(zhuǎn)向全員參與。
2．5改善實(shí)驗(yàn)室安全硬件設(shè)施動(dòng)物醫(yī)學(xué)專業(yè)的學(xué)生需要要掌握動(dòng)物的內(nèi)臟器官、肌肉、骨骼等解剖結(jié)構(gòu)，會(huì)用福爾馬林處理動(dòng)物標(biāo)本，由于福爾馬林易揮發(fā)，常常使實(shí)驗(yàn)場所充滿有毒和異味廢氣，根據(jù)需要已配備了大功率通風(fēng)系統(tǒng)，并保證通風(fēng)換氣設(shè)備的正常運(yùn)轉(zhuǎn)。對大功率用電的設(shè)備配備專用電線，定期組織后勤部門對線路進(jìn)行維護(hù)。將傳染病實(shí)驗(yàn)室、感染實(shí)驗(yàn)室以及解剖實(shí)驗(yàn)室從教學(xué)實(shí)驗(yàn)室分離出去，分別建立了單獨(dú)的解剖樓和感染樓。專門配備高壓滅菌柜對實(shí)驗(yàn)用品及生物廢棄品進(jìn)行消毒。以消除實(shí)驗(yàn)室之間的交叉污染和污染傳播，杜絕生物安全問題的發(fā)生。
2．6建立應(yīng)急機(jī)制應(yīng)急預(yù)案準(zhǔn)備及演練。ISO14001體系要求對不同的災(zāi)害和應(yīng)急事件要有切實(shí)可行的預(yù)防方案，并保證方案的執(zhí)行。實(shí)驗(yàn)中心成立了事故應(yīng)急小組，每個(gè)實(shí)驗(yàn)室配備4～6個(gè)滅火器，對實(shí)驗(yàn)人員和學(xué)生培訓(xùn)滅火器的使用方法，并對緊急情況下的逃生路線進(jìn)行了模擬演練，對災(zāi)害發(fā)生時(shí)的應(yīng)對常識、簡單救護(hù)知識進(jìn)行普及性培訓(xùn)，盡量減少災(zāi)害、突發(fā)事件的發(fā)生，在發(fā)生突發(fā)事件中，能夠正確處理，將損失降到最低限度。
3結(jié)語
1.1實(shí)驗(yàn)室設(shè)施、設(shè)備不完善
實(shí)驗(yàn)室在設(shè)計(jì)和建設(shè)上沒有嚴(yán)格遵守國家相關(guān)法律法規(guī)，致使實(shí)驗(yàn)室本身在建設(shè)方面就沒有達(dá)到相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)，如室內(nèi)流通環(huán)節(jié)不合理、密閉性差、通風(fēng)系統(tǒng)過濾器裝置不合理等，存在實(shí)驗(yàn)室生物安全隱患；缺乏與承擔(dān)教學(xué)和科研任務(wù)相適應(yīng)的實(shí)驗(yàn)室生物安全設(shè)施和設(shè)備，在影響正常實(shí)驗(yàn)活動(dòng)開展的同時(shí)，也存在著實(shí)驗(yàn)室生物安全隱患。
1.2日常管理不規(guī)范
醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)專業(yè)實(shí)驗(yàn)室是進(jìn)行實(shí)驗(yàn)教學(xué)和科研的工作場所，操作者在進(jìn)行標(biāo)本涂片、染色鏡檢、分離培養(yǎng)、生化鑒定、藥敏試驗(yàn)、血清分型等不同實(shí)驗(yàn)操作時(shí)，都要接觸各種病原微生物及生物危險(xiǎn)因子。日常管理不規(guī)范的表現(xiàn)有：個(gè)別實(shí)驗(yàn)室存在不使用微生物專用培養(yǎng)箱而采用大房間開放式培養(yǎng)微生物的現(xiàn)象；在實(shí)驗(yàn)教學(xué)過程中產(chǎn)生廢棄物所需要的收集、包裝和滅活等用品與設(shè)備不能完全滿足實(shí)驗(yàn)室的生物安全要求；有些實(shí)驗(yàn)室采用沒有標(biāo)志的普通垃圾袋包裝生物垃圾；學(xué)生將實(shí)驗(yàn)室工作服帶出實(shí)驗(yàn)室個(gè)人保管，不符合實(shí)驗(yàn)室生物安全要求。日常管理不規(guī)范暴露出許多安全隱患，因此，加強(qiáng)醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)專業(yè)實(shí)驗(yàn)室的生物安全管理是非常必要的。
1.3學(xué)生自我安全意識薄弱、操作不當(dāng)
由于專業(yè)的特殊性，許多實(shí)驗(yàn)課所用的標(biāo)本來自病人，如臨床檢驗(yàn)基礎(chǔ)、免疫學(xué)檢驗(yàn)、生化檢驗(yàn)、微生物檢驗(yàn)等采用人體的各種分泌物、排泄物、體液等標(biāo)本。即使是學(xué)生提供的標(biāo)本，也可能存在諸如乙肝病毒、流感病毒、痢疾志賀氏菌、沙門氏菌等病原菌。另外，在微生物學(xué)檢驗(yàn)中，經(jīng)常接觸的有三類、四類病原微生物以及少數(shù)二類高致病性微生物和有害生物因子，這些都出現(xiàn)在醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中，學(xué)生常常接觸已知和潛在的生物危險(xiǎn)因素。目前，由于實(shí)驗(yàn)室生物安全教育未能到位，部分學(xué)生對于生物安全知識了解甚少，沒有意識到實(shí)驗(yàn)室生物安全的重要性，未能認(rèn)識到實(shí)驗(yàn)過程中可能存在很多安全隱患。例如有的學(xué)生進(jìn)實(shí)驗(yàn)室不穿工作服，接觸陽性標(biāo)本不戴手套，微生物接種時(shí)不戴帽子、口罩，有的甚至在實(shí)驗(yàn)室吃零食、喝飲料，將干凈的書或物品隨手放在實(shí)驗(yàn)臺上，將實(shí)驗(yàn)廢液隨意倒在下水道里，實(shí)驗(yàn)用過的陽性標(biāo)本不經(jīng)處理就扔在垃圾桶里，下課不洗手或不認(rèn)真洗手。
1.險(xiǎn)評估工作不到位
在使用傳染性或有潛在傳染性標(biāo)本進(jìn)行實(shí)驗(yàn)前，必須對微生物的危害進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)評估，確定實(shí)驗(yàn)應(yīng)在哪一級的生物安全防護(hù)實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行，并根據(jù)評估結(jié)果制訂相應(yīng)的操作規(guī)程、管理制度和緊急事故處理辦法，形成書面文件并嚴(yán)格遵守執(zhí)行。然而一些高校對這一重要環(huán)節(jié)重視不夠，風(fēng)險(xiǎn)評估工作不到位，還有一些高校完全沒有對在實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行的病原微生物實(shí)驗(yàn)進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)評估，沒有形成行之有效的管理文件。
1.5管理監(jiān)督措施缺乏
目前，醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)專業(yè)實(shí)驗(yàn)室一般都建立了實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理體系，制訂了標(biāo)準(zhǔn)操作程序，但往往忽略了實(shí)驗(yàn)室生物安全的內(nèi)容，不但缺乏實(shí)驗(yàn)室生物安全的行政管理規(guī)范，而且缺乏具體的實(shí)驗(yàn)室技術(shù)操作管理規(guī)范。部分實(shí)驗(yàn)室尚缺乏完善的生物安全管理及監(jiān)督措施，多數(shù)條款沒有具體分工，未能責(zé)任到人，監(jiān)管不力。
2開展實(shí)驗(yàn)室生物安全教育的措施
2.1做好生物安全的培訓(xùn)工作
應(yīng)對實(shí)驗(yàn)室工作人員和學(xué)生進(jìn)行生物安全知識培訓(xùn)，組織教師和學(xué)生認(rèn)真學(xué)習(xí)《病原微生物實(shí)驗(yàn)室生物安全管理?xiàng)l例》、《實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求》、《微生物和生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室生物安全通用準(zhǔn)則（WS233-2002）》等法規(guī)文件，把實(shí)驗(yàn)室生物安全教育納入日常管理工作，做到常態(tài)化、制度化、規(guī)范化。在日常實(shí)驗(yàn)教學(xué)中，教師應(yīng)將生物安全知識灌輸給學(xué)生，使學(xué)生盡早樹立安全意識，養(yǎng)成良好的實(shí)驗(yàn)習(xí)慣，嚴(yán)防生物安全事故的發(fā)生。
2.2完善并嚴(yán)格執(zhí)行生物安全管理制度
建立健全實(shí)驗(yàn)室規(guī)章制度，制訂并嚴(yán)格執(zhí)行實(shí)驗(yàn)室生物安全管理規(guī)程。同時(shí)，把責(zé)任分級落實(shí)到在實(shí)驗(yàn)室開展實(shí)驗(yàn)活動(dòng)的所有人員，做到“誰管理誰負(fù)責(zé)、誰使用誰負(fù)責(zé)”，并落實(shí)責(zé)任追究制度，絕不姑息任何違反生物安全管理制度的行為。建立嚴(yán)格的實(shí)驗(yàn)室準(zhǔn)入制度，學(xué)生進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室必須穿清潔的工作服，除必要的書籍、筆記本和文具外，其他個(gè)人物品一律不得帶入實(shí)驗(yàn)室。嚴(yán)禁在實(shí)驗(yàn)室里大聲說話、打鬧、亂走動(dòng)，嚴(yán)禁學(xué)生在實(shí)驗(yàn)室里吃東西、喝飲料、吸煙、嚼口香糖，不可把任何東西放入口中。如果受到病原菌污染，應(yīng)立即消毒，不可輕視和怠慢。微生物實(shí)驗(yàn)材料的數(shù)量和種類繁多，如化學(xué)試劑、劇毒藥品、玻璃器材、生物制品、菌種、實(shí)驗(yàn)儀器、培養(yǎng)基等，若不加以科學(xué)管理，實(shí)驗(yàn)室就雜亂無章，直接影響實(shí)驗(yàn)室的整潔和工作效率，因此應(yīng)嚴(yán)格執(zhí)行生物安全管理制度。
2.3加強(qiáng)實(shí)驗(yàn)室的硬件建設(shè)工作
加強(qiáng)實(shí)驗(yàn)室生物安全硬件建設(shè)已成為當(dāng)務(wù)之急，要遵守國家的相關(guān)法律法規(guī)，科學(xué)合理地設(shè)計(jì)和建設(shè)。對已開展病原微生物研究活動(dòng)的實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行定期檢查，確定不同生物安全級別實(shí)驗(yàn)室的儀器設(shè)備是否運(yùn)行、保養(yǎng)良好，是否配備了有效的生物安全防護(hù)設(shè)備。
2.4加強(qiáng)實(shí)驗(yàn)室日常工作中的生物安全管理
嚴(yán)格管理菌種、危險(xiǎn)品、劇毒藥品。目前實(shí)驗(yàn)室所涉及的病原菌有炭疽桿菌、傷寒桿菌、變形桿菌、大腸桿菌、枯草桿菌、產(chǎn)氣桿菌、痢疾桿菌、葡萄球菌、黃色微球菌、鏈球菌、水弧菌、腦膜炎雙球菌等。為了合理有效地保藏管理菌種，根據(jù)《中國醫(yī)學(xué)微生物菌種保藏管理辦法》和實(shí)驗(yàn)室實(shí)際狀況，制訂實(shí)驗(yàn)室菌種的保藏管理辦法：（1）購買菌種時(shí)必須是衛(wèi)生部規(guī)定的正規(guī)單位，為了避免菌種的死亡或變異，應(yīng)采取妥善、可靠的方法，設(shè)置專用冷柜保存菌種。（2）建立菌種使用記錄，指定專人負(fù)責(zé)，對一、二類菌種設(shè)專柜，單獨(dú)保存。（3）使用菌種時(shí)采取嚴(yán)格防護(hù)措施，并嚴(yán)格遵守操作規(guī)程。（4）加強(qiáng)菌種安全管理，防止菌種丟失。（5）危險(xiǎn)品、劇毒藥品管理應(yīng)符合國家和公安部門及學(xué)校統(tǒng)一規(guī)定，落實(shí)必要的安全防范措施，由專人、專柜保管且上鎖，防止危險(xiǎn)品及劇毒藥品被盜、泄漏或誤用。
2.5加強(qiáng)對實(shí)驗(yàn)廢棄物和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的管理
對實(shí)驗(yàn)過程中產(chǎn)生的廢棄物進(jìn)行處理是控制實(shí)驗(yàn)室生物安全的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，必須明確掌握生物安全廢棄物的分類原則，并嚴(yán)格執(zhí)行相應(yīng)的處理程序，避免實(shí)驗(yàn)室或環(huán)境污染，進(jìn)而保證實(shí)驗(yàn)教學(xué)的順利進(jìn)行；使用的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物必須經(jīng)過檢疫合格，且不得擅自帶離實(shí)驗(yàn)室飼養(yǎng)，實(shí)驗(yàn)結(jié)束后存活動(dòng)物要送回動(dòng)物室，死亡動(dòng)物要做無害化處理。實(shí)驗(yàn)室廢棄物分為感染性廢棄物和非感染性廢棄物，不能隨意丟棄，應(yīng)按《醫(yī)療廢物管理?xiàng)l例》的規(guī)定進(jìn)行隔離、消毒、包裝、轉(zhuǎn)運(yùn)、保存和處置。廢棄物應(yīng)分類按不同要求進(jìn)行消毒處理，如微生物實(shí)驗(yàn)室感染性材料（血液、痰液標(biāo)本等）及接觸感染性材料應(yīng)放置于結(jié)實(shí)塑料袋中密封，高壓120℃消毒30分鐘才能移出實(shí)驗(yàn)室。用過的實(shí)驗(yàn)材料如試管、玻片、燒杯等放入裝有消毒液的廢液缸內(nèi)，每天更換廢液缸的消毒液，應(yīng)保證消毒液的量為廢液缸內(nèi)總量的1/2，浸泡至少30分鐘才能移出實(shí)驗(yàn)室。廢棄物應(yīng)分類丟入垃圾袋，依據(jù)廢棄物的性質(zhì)及數(shù)量選用適合的包裝材料，確保無泄漏，處理前后都應(yīng)在固定位置存放，并由專人負(fù)責(zé)管理。
2.6加強(qiáng)實(shí)驗(yàn)室的消毒和清潔管理
【關(guān)鍵詞】無線網(wǎng)絡(luò)安全性研究電磁波
從上個(gè)世紀(jì)90年代以來，移動(dòng)通信和Internet是信息產(chǎn)業(yè)發(fā)展最快的兩個(gè)領(lǐng)域，它們直接影響了億萬人的生活，移動(dòng)通信使人們可以任何時(shí)間、任何地點(diǎn)和任何人進(jìn)行通信，Internet使人們可以獲得豐富多彩的信息。那么如何把移動(dòng)通信和Internet結(jié)合起來，達(dá)到可以任何人、任何地方都能聯(lián)網(wǎng)呢?無線網(wǎng)絡(luò)解決了這個(gè)問題。無線網(wǎng)絡(luò)和個(gè)人通信網(wǎng)(PCN)代表了21世紀(jì)通信網(wǎng)絡(luò)技術(shù)的發(fā)展方向。PCN主要用于支持速率小于56bit/s的語音/數(shù)據(jù)通信，而無線網(wǎng)絡(luò)主要用于傳輸速率大于1Mbit/s的局域網(wǎng)和室內(nèi)數(shù)據(jù)通信，同時(shí)為未來多媒體應(yīng)用(語音、數(shù)據(jù)和圖像)提供了一種潛在的手段。計(jì)算機(jī)無線聯(lián)網(wǎng)方式是有線聯(lián)網(wǎng)方式的一種補(bǔ)充，它是在有線網(wǎng)的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的，使聯(lián)網(wǎng)的計(jì)算機(jī)可以自由移動(dòng)，能快速、方便的解決以有線方式不易實(shí)現(xiàn)的信道聯(lián)接問題。然而，由于無線網(wǎng)絡(luò)采用空間傳播的電磁波作為信息的載體，因此與有線網(wǎng)絡(luò)不同，輔以專業(yè)設(shè)備，任何人都有條件竊聽或干擾信息，因此在無線網(wǎng)絡(luò)中，網(wǎng)絡(luò)安全是至關(guān)重要的。
目前常用的計(jì)算機(jī)無線通信手段有無線電波(短波或超短波、微波)和光波(紅外線、激光)。這些無線通訊媒介各有特點(diǎn)和適用性。
紅外線和激光：易受天氣影響，也不具有穿透力，難以實(shí)際應(yīng)用。
短波或超短波：類似電臺或是電視臺廣播，采用調(diào)幅、調(diào)頻或調(diào)相的載波，通信距離可到數(shù)十公里，早已用于計(jì)算機(jī)通信，但速率慢，保密性差，沒有通信的單一性。而且是窄寬通信，既干擾別人也易受其他電臺或電氣設(shè)備的干擾，可靠性差。并且頻道擁擠、頻段需專門申請。這使之不具備無線聯(lián)網(wǎng)的基本要求。
微波：以微波收、發(fā)機(jī)作為計(jì)算機(jī)網(wǎng)的通信信道，因其頻率很高，故可以實(shí)現(xiàn)高的數(shù)據(jù)傳輸速率。受天氣影響很小。雖然在這樣高的頻率下工作，要求通信的兩點(diǎn)彼此可視，但其一定的穿透能力和可以控制的波角對通信是極有幫助的。
綜合比較前述各種無線通信媒介，可看到有發(fā)展?jié)摿Φ氖遣捎梦⒉ㄍㄐ?。它具有傳輸?shù)據(jù)率高(可達(dá)11Mbit/s)，發(fā)射功率小(只有100～250mw)保密性好，抗干擾能力很強(qiáng)，不會(huì)與其他無線電設(shè)備或用戶互相發(fā)生干擾的特點(diǎn)。
擴(kuò)展頻譜技術(shù)在50年前第一次被軍方公開介紹，它用來進(jìn)行保密傳輸。從一開始它就設(shè)計(jì)成抗噪聲，干擾、阻塞和未授權(quán)檢測。擴(kuò)展頻儲(chǔ)發(fā)送器用一個(gè)非常弱的功率信號在一個(gè)很寬的頻率范圍內(nèi)發(fā)射出去，與窄帶射頻相反，它將所有的能量集中到一個(gè)單一的頻點(diǎn)。擴(kuò)展頻譜的實(shí)現(xiàn)方式有多種，最常用的兩種是直接序列和跳頻序列。
無線網(wǎng)技術(shù)的安全性有以下4級定義：第一級，擴(kuò)頻、跳頻無線傳輸技術(shù)本身使盜聽者難以捉到有用的數(shù)據(jù)。第二級，采取網(wǎng)絡(luò)隔離及網(wǎng)絡(luò)認(rèn)證措施。第三級，設(shè)置嚴(yán)密的用戶口令及認(rèn)證措施，防止非法用戶入侵。第四級，設(shè)置附加的第三方數(shù)據(jù)加密方案，即使信號被盜聽也難以理解其中的內(nèi)容。
無線網(wǎng)的站點(diǎn)上應(yīng)使用口令控制，如NovellNetWare和MicrosoftNT等網(wǎng)絡(luò)操作系統(tǒng)和服務(wù)器提供了包括口令管理在內(nèi)的內(nèi)建多級安全服務(wù)。口令應(yīng)處于嚴(yán)格的控制之下并經(jīng)常變更。假如用戶的數(shù)據(jù)要求更高的安全性，要采用最高級別的網(wǎng)絡(luò)整體加密技術(shù)，數(shù)據(jù)包中的數(shù)據(jù)發(fā)送到局域網(wǎng)之前要用軟件加密或硬件的方法加密，只有那些擁有正確密鑰的站點(diǎn)才可以恢復(fù)，讀取這些數(shù)據(jù)。無線局域網(wǎng)還有些其他好的安全性。首先無線接入點(diǎn)會(huì)過濾掉那些對相關(guān)無線站點(diǎn)而言毫無用處的網(wǎng)絡(luò)數(shù)據(jù)，這就意味著大部分有線網(wǎng)絡(luò)數(shù)據(jù)根本不會(huì)以電波的形式發(fā)射出去；其次，無線網(wǎng)的節(jié)點(diǎn)和接入點(diǎn)有個(gè)與環(huán)境有關(guān)的轉(zhuǎn)發(fā)范圍限制，這個(gè)范圍一般是很小。這使得竊聽者必須處于節(jié)點(diǎn)或接入點(diǎn)附近。最后，無線用戶具有流動(dòng)性，可能在一次上網(wǎng)時(shí)間內(nèi)由一個(gè)接入點(diǎn)移動(dòng)至另一個(gè)接入點(diǎn)，與之對應(yīng)，進(jìn)行網(wǎng)絡(luò)通信所使用的跳頻序列也會(huì)發(fā)生變化，這使得竊聽幾乎無可能。無論是否有無線網(wǎng)段，大多數(shù)的局域網(wǎng)都必須要有一定級別的安全措施。在內(nèi)部好奇心、外部入侵和電線竊聽面前，甚至有線網(wǎng)都顯得很脆弱。沒有人愿意冒險(xiǎn)將局域網(wǎng)上的數(shù)據(jù)暴露于不速之客和惡意入侵之前。而且，如果用戶的數(shù)據(jù)相當(dāng)機(jī)密，比如是銀行網(wǎng)和軍用網(wǎng)上的數(shù)據(jù)，那么，為了確保機(jī)密，必須采取特殊措施。
常見的無線網(wǎng)絡(luò)安全加密措施可以采用為以下幾種。
一、服務(wù)區(qū)標(biāo)示符(SSID)
無線工作站必需出示正確的SSD才能訪問AP，因此可以認(rèn)為SSID是一個(gè)簡單的口令，從而提供一定的安全。如果配置AP向外廣播其SSID，那么安全程序?qū)⑾陆?；由于一般情況下，用戶自己配置客戶端系統(tǒng)，所以很多人都知道該SSID，很容易共享給非法用戶。目前有的廠家支持“任何”SSID方式，只要無線工作站在任何AP范圍內(nèi)，客戶端都會(huì)自動(dòng)連接到AP，這將跳過SSID安全功能。
二、物理地址(MAC)過濾
每個(gè)無線工作站網(wǎng)卡都由唯一的物理地址標(biāo)示，因此可以在AP中手工維護(hù)一組允許訪問的MAC地址列表，實(shí)現(xiàn)物理地址過濾。物理地址過濾屬于硬件認(rèn)證，而不是用戶認(rèn)證。這種方式要求AP中的MAC地址列表必須隨時(shí)更新，目前都是手工操作；如果用戶增加，則擴(kuò)展能力很差，因此只適合于小型網(wǎng)絡(luò)規(guī)模。
三、連線對等保密(WEP)
在鏈路層采用RC4對稱加密技術(shù)，鑰匙長40位，從而防止非授權(quán)用戶的監(jiān)聽以及非法用戶的訪問。用戶的加密鑰匙必需與AP的鑰匙相同，并且一個(gè)服務(wù)區(qū)內(nèi)的所有用戶都共享一把鑰匙。WEP雖然通過加密提供網(wǎng)絡(luò)的安全性，但也存在許多缺陷：一個(gè)用戶丟失鑰匙將使整個(gè)網(wǎng)絡(luò)不安全；40位鑰匙在今天很容易破解；鑰匙是靜態(tài)的，并且要手工維護(hù)，擴(kuò)展能力差。為了提供更高的安全性，802.11提供了WEP2該技術(shù)與WEP類似。WEP2采用128位加密鑰匙，從而提供更高的安全。
四、虛擬專用網(wǎng)絡(luò)(VPN)
虛擬專用網(wǎng)絡(luò)是指在一個(gè)公共IP網(wǎng)絡(luò)平臺上通過隧道以及加密技術(shù)保證專用數(shù)據(jù)的網(wǎng)絡(luò)安全性，目前許多企業(yè)以及運(yùn)營商已經(jīng)采用VPN技術(shù)。VPN可以替代連線對等保密解決方案以及物理地址過濾解決方案。采用VPN技術(shù)的另外一個(gè)好處是可以提供基于Radius的用戶認(rèn)證以及計(jì)費(fèi)。VPN技術(shù)不屬于802.11標(biāo)準(zhǔn)定義，因此它是一種增強(qiáng)性網(wǎng)絡(luò)解決方案。
[關(guān)鍵詞]無線網(wǎng)絡(luò)安全防范措施
隨著信息化技術(shù)的飛速發(fā)展,很多網(wǎng)絡(luò)都開始實(shí)現(xiàn)無線網(wǎng)絡(luò)的覆蓋以此來實(shí)現(xiàn)信息電子化交換和資源共享。無線網(wǎng)絡(luò)和無線局域網(wǎng)的出現(xiàn)大大提升了信息交換的速度和質(zhì)量,為很多的用戶提供了便捷和子偶的網(wǎng)絡(luò)服務(wù),但同時(shí)也由于無線網(wǎng)絡(luò)本身的特點(diǎn)造成了安全上的隱患。具體的說來,就是無線介質(zhì)信號由于其傳播的開放性設(shè)計(jì),使得其在傳輸?shù)倪^程中很難對傳輸介質(zhì)實(shí)施有效的保護(hù)從而造成傳輸信號有可能被他人截獲,被不法之徒利用其漏洞來攻擊網(wǎng)絡(luò)。因此,如何在組網(wǎng)和網(wǎng)絡(luò)設(shè)計(jì)的時(shí)候?yàn)闊o線網(wǎng)絡(luò)信號和無線局域網(wǎng)實(shí)施有效的安全保護(hù)機(jī)制就成為了當(dāng)前無線網(wǎng)絡(luò)面臨的重大課題。
一、無線網(wǎng)絡(luò)的安全隱患分析
無線局域網(wǎng)的基本原理就是在企業(yè)或者組織內(nèi)部通過無線通訊技術(shù)來連接單個(gè)的計(jì)算機(jī)終端,以此來組成可以相互連接和通訊的資源共享系統(tǒng)。無線局域網(wǎng)區(qū)別于有線局域網(wǎng)的特點(diǎn)就是通過空間電磁波來取代傳統(tǒng)的有限電纜來實(shí)施信息傳輸和聯(lián)系。對比傳統(tǒng)的有線局域網(wǎng),無線網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建增強(qiáng)了電腦終端的移動(dòng)能力,同時(shí)它安裝簡單,不受地理位置和空間的限制大大提高了信息傳輸?shù)男?但同時(shí),也正是由于無線局域網(wǎng)的特性,使得其很難采取和有線局域網(wǎng)一樣的網(wǎng)絡(luò)安全機(jī)制來保護(hù)信息傳輸?shù)陌踩?換句話無線網(wǎng)絡(luò)的安全保護(hù)措施難度原因大于有線網(wǎng)絡(luò)。
IT技術(shù)人員在規(guī)劃和建設(shè)無線網(wǎng)絡(luò)中面臨兩大問題:首先,市面上的標(biāo)準(zhǔn)與安全解決方案太多,到底選什么好,無所適從;第二,如何避免網(wǎng)絡(luò)遭到入侵或攻擊?在有線網(wǎng)絡(luò)階段,技術(shù)人員可以通過部署防火墻硬件安全設(shè)備來構(gòu)建一個(gè)防范外部攻擊的防線,但是,“兼顧的防線往往從內(nèi)部被攻破”。由于無線網(wǎng)絡(luò)具有接入方便的特點(diǎn),使得我們原先耗資部署的有線網(wǎng)絡(luò)防范設(shè)備輕易地就被繞過,成為形同虛設(shè)的“馬奇諾防線”。
針對無線網(wǎng)絡(luò)的主要安全威脅有如下一些:
1.數(shù)據(jù)竊聽。竊聽網(wǎng)絡(luò)傳輸可導(dǎo)致機(jī)密敏感數(shù)據(jù)泄漏、未加保護(hù)的用戶憑據(jù)曝光,引發(fā)身份盜用。它還允許有經(jīng)驗(yàn)的入侵者手機(jī)有關(guān)用戶的IT環(huán)境信息,然后利用這些信息攻擊其他情況下不易遭到攻擊的系統(tǒng)或數(shù)據(jù)。甚至為攻擊者提供進(jìn)行社會(huì)工程學(xué)攻擊的一系列商信息。
2.截取和篡改傳輸數(shù)據(jù)。如果攻擊者能夠連接到內(nèi)部網(wǎng)絡(luò),則他可以使用惡意計(jì)算機(jī)通過偽造網(wǎng)關(guān)等途徑來截獲甚至修改兩個(gè)合法方之劍正常傳輸?shù)木W(wǎng)絡(luò)數(shù)據(jù)。
二、常見的無線網(wǎng)絡(luò)安全措施
綜合上述針對無線網(wǎng)絡(luò)的各種安全威脅,我們不難發(fā)現(xiàn),把好“接入關(guān)”是我們保障企業(yè)無線網(wǎng)絡(luò)安全性的最直接的舉措。目前的無線網(wǎng)絡(luò)安全措施基本都是在接入關(guān)對入侵者設(shè)防,常見的安全措施有以下各種。
1.MAC地址過濾
MAC地址過濾在有線網(wǎng)絡(luò)安全措施中是一種常見的安全防范手段,因此其操作方法也和在有線網(wǎng)絡(luò)中操作交換機(jī)的方式一致。通過無線控制器將指定的無線網(wǎng)卡的物理地址(MAC地址)下發(fā)到各個(gè)AP中,或者直接存儲(chǔ)在無線控制器中,或者在AP交換機(jī)端進(jìn)行設(shè)置。
2.隱藏SSID
SSID(ServiceSetIdentifier,服務(wù)標(biāo)識符)是用來區(qū)分不同的網(wǎng)絡(luò),其作用類似于有線網(wǎng)絡(luò)中的VLAN,計(jì)算機(jī)接入某一個(gè)SSID的網(wǎng)絡(luò)后就不能直接與另一個(gè)SSID的網(wǎng)絡(luò)進(jìn)行通信了,SSID經(jīng)常被用來作為不同網(wǎng)絡(luò)服務(wù)的標(biāo)識。一個(gè)SSID最多有32個(gè)字符構(gòu)成,無線終端接入無線網(wǎng)路時(shí)必須提供有效的SIID,只有匹配的SSID才可接入。一般來說,無線AP會(huì)廣播SSID,這樣,接入終端可以通過掃描獲知附近存在哪些可用的無線網(wǎng)絡(luò),例如WINDOWSXP自帶掃描功能,可以將能聯(lián)系到的所有無線網(wǎng)絡(luò)的SSID羅列出來。因此,出于安全考慮,可以設(shè)置AP不廣播SSID,并將SSID的名字構(gòu)造成一個(gè)不容易猜解的長字符串。這樣,由于SSID被隱藏起來了,接入端就不能通過系統(tǒng)自帶的功能掃描到這個(gè)實(shí)際存在的無線網(wǎng)絡(luò),即便他知道有一個(gè)無線網(wǎng)絡(luò)存在,但猜不出SSID全名也是無法接入到這個(gè)網(wǎng)絡(luò)中去的。
三、無線網(wǎng)絡(luò)安全措施的選擇
應(yīng)用的方便性與安全性之間永遠(yuǎn)是一對矛盾。安全性越高,則一定是以喪失方便性為代價(jià)的。但是在實(shí)際的無線網(wǎng)絡(luò)的應(yīng)用中,我們不能不考慮應(yīng)用的方便性。因此,我們在對無線網(wǎng)路安全措施的選擇中應(yīng)該均衡考慮方便性和安全性。
在接入無線AP時(shí)采用WAP加密模式,又因?yàn)椴徽揝SID是否隱藏攻擊者都能通過專用軟件探測到SSID,因此不隱藏SSID,以提高接入的方便性。這樣在接入時(shí)只要第一次需要輸入接入密碼,以后就可以不用輸入接入密碼了。
使用強(qiáng)制Portal+802.1x這兩種認(rèn)證方式相結(jié)合的方法能有效地解決無線網(wǎng)絡(luò)的安全,具有一定的現(xiàn)實(shí)意義。來訪用戶所關(guān)心的是方便和快捷,對安全性的要求不高。強(qiáng)制Portal認(rèn)證方式在用戶端不需要安裝額外的客戶端軟件,用戶直接使用Web瀏覽器認(rèn)證后即可上網(wǎng)。采用此種方式,對來訪用戶來說簡單、方便、快速,但安全性比較差。
此外,如果在資金可以保證的前提下,在無線網(wǎng)絡(luò)中使用無線網(wǎng)絡(luò)入侵檢測設(shè)備進(jìn)行主動(dòng)防御,也是進(jìn)一步加強(qiáng)無線網(wǎng)絡(luò)安全性的有效手段。
最后,任何的網(wǎng)絡(luò)安全技術(shù)都是在人的使用下發(fā)揮作用的,因此,最后一道防線就是使用者,只有每一個(gè)使用者加強(qiáng)無線網(wǎng)絡(luò)安全意識,才能真正實(shí)現(xiàn)無線網(wǎng)絡(luò)的安全。否則,黑客或攻擊者的一次簡單的社會(huì)工程學(xué)攻擊就可以在2分鐘內(nèi)使網(wǎng)絡(luò)管理人員配置的各種安全措施變得形同虛設(shè)。
現(xiàn)在,不少企業(yè)和組織都已經(jīng)實(shí)現(xiàn)了整個(gè)的無線覆蓋。但在建設(shè)無線網(wǎng)絡(luò)的同時(shí),因?yàn)閷o線網(wǎng)絡(luò)的安全不夠重視,對局域網(wǎng)無線網(wǎng)絡(luò)的安全考慮不及時(shí),也造成了一定的影響和破壞。做好無線網(wǎng)絡(luò)的安全管理工作,并完成全校無線網(wǎng)絡(luò)的統(tǒng)一身份驗(yàn)證,是當(dāng)前組建無線網(wǎng)必須要考慮的事情。只有這樣才能做到無線網(wǎng)絡(luò)與現(xiàn)有有線網(wǎng)絡(luò)的無縫對接,確保無線網(wǎng)絡(luò)的高安全性,提高企業(yè)的信息化的水平。
參考文獻(xiàn):
[1]譚潤芳.無線網(wǎng)絡(luò)安全性探討[J].信息科技,2008,37(6):24-26.
1.1安全風(fēng)險(xiǎn)控制不到位
鐵路工務(wù)大修的施工項(xiàng)目較多，包含大機(jī)清篩、道岔換鋪、人工換軌等其他零散施工項(xiàng)目，對鐵路運(yùn)營的安全風(fēng)險(xiǎn)影響較大。如果在進(jìn)行鐵路工務(wù)大修施工過程中，施工安全風(fēng)險(xiǎn)控制不到位，沒有針對性的風(fēng)險(xiǎn)控制方案，沒有詳細(xì)的風(fēng)險(xiǎn)應(yīng)急預(yù)案，一旦發(fā)生緊急情況時(shí)，將很難控制現(xiàn)場施工，直接影響到施工質(zhì)量和期限，甚至有可能造成嚴(yán)重的人員傷亡以及財(cái)產(chǎn)損失事故。
1.2安全責(zé)任落實(shí)不到位
落實(shí)責(zé)任管理是安全管理最有效的途徑，但是現(xiàn)階段在一些鐵路工務(wù)大修工作中，由于對于安全管理工作重視不足，因而沒有制定相應(yīng)的安全責(zé)任，如果作業(yè)人員安全職責(zé)不明確，責(zé)任落實(shí)不到位，很難在根源上防控施工安全問題，一旦出現(xiàn)安全問題，無法落實(shí)責(zé)任人。也正是安全責(zé)任落實(shí)不到位問題，會(huì)在施工中出現(xiàn)工作進(jìn)度放慢，對接不上等問題。
1.3安全教育培訓(xùn)不到位
人為因素對鐵路工務(wù)大修施工質(zhì)量的影響是非常大的，大修施工涉及車務(wù)、電務(wù)、供電、工務(wù)等多家單位，施工中交叉影響、相互干擾的因素多，安全風(fēng)險(xiǎn)因子也隨之增加，這對于施工人員的自身素質(zhì)能力水平也提出了很高的要求，而且施工人員的自身素質(zhì)、管理者的管理水平都會(huì)對工程質(zhì)量產(chǎn)生重要影響。如果安全教育工作不到位，施工人員會(huì)顯得懶散，對安全問題不夠重視。為了保證施工質(zhì)量，在實(shí)際施工過程中就應(yīng)該慎重選擇，應(yīng)該選擇那些經(jīng)驗(yàn)豐富且安全意識強(qiáng)的作業(yè)人員。
2鐵路工務(wù)大修施工的安全管理措施
2.1安全風(fēng)險(xiǎn)控制為關(guān)鍵點(diǎn)
在工務(wù)大修施工過程中，施工現(xiàn)場會(huì)存在諸多的安全風(fēng)險(xiǎn)。在施工之前，要對存在的安全隱患進(jìn)行清除。在此情況下，應(yīng)該從安全風(fēng)險(xiǎn)控制角度出發(fā)，做好安全預(yù)想。這個(gè)過程中，不僅要消除整條線路的安全隱患，還要對工務(wù)大修施工現(xiàn)場進(jìn)行安全定位。大修施工現(xiàn)場管理過程中，工作的出發(fā)點(diǎn)要立足于現(xiàn)場實(shí)際情況，立足于一線職工具體工作情況，再根據(jù)不同的施工項(xiàng)目來確定出施工方案、安全保障措施等，這樣進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)控制質(zhì)量會(huì)高一些。進(jìn)行施工時(shí)，不能存在僥幸心理，不能違章施工，應(yīng)該根據(jù)操作標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行，正確使用施工機(jī)械，科學(xué)做好安全防控工作，將安全落實(shí)下去，這樣才能保障安全生產(chǎn)。眾所周知，工務(wù)大修施工線段比較長，人員屬于分散狀態(tài)，安全管理跨度比較大，這不利于施工安全。因此，理當(dāng)做好管理工作。管住邊遠(yuǎn)作業(yè)人員不失管，管住單獨(dú)作業(yè)人員不失教，管住重點(diǎn)施工人員不失控，參與施工的單位和部門，都應(yīng)該掌握好安全風(fēng)險(xiǎn)控制方法，在施工中基于安全理念，不斷提升遵章守紀(jì)的自覺性，將安全風(fēng)險(xiǎn)根植在腦海中。干部職工根據(jù)自己的崗位安全職責(zé)，加入安全風(fēng)險(xiǎn)排查，落實(shí)安全風(fēng)險(xiǎn)責(zé)任。
2.2安全責(zé)任落實(shí)下去
工務(wù)大修的施工現(xiàn)場最常強(qiáng)調(diào)的問題就是“重視安全”，然而重視并不是簡單的說說就可以實(shí)現(xiàn)的，需要在施工過程中重視安全責(zé)任，重視安全意識，做好督查和引導(dǎo)工作。施工中任何施工作業(yè)都有可能存在安全風(fēng)險(xiǎn)，這些風(fēng)險(xiǎn)可能存在于施工現(xiàn)場的任何環(huán)節(jié)。因此，在施工過程中，要將安全生產(chǎn)融入每個(gè)環(huán)節(jié)中，必須將其提到日程上，時(shí)刻警惕，切實(shí)杜絕安全風(fēng)險(xiǎn)出現(xiàn)。針對安全問題，可以借助閉環(huán)管理方式去解決：第一發(fā)現(xiàn)問題，第二制定出措施，第三進(jìn)行整改，第四復(fù)查。如果該環(huán)節(jié)中發(fā)現(xiàn)了安全隱患，需要專門的負(fù)責(zé)人進(jìn)行跟蹤整改。上級領(lǐng)導(dǎo)要對其進(jìn)行現(xiàn)場安全檢查，確實(shí)將安全隱患控制住，使得施工進(jìn)展更加順利。強(qiáng)化各級人員安全責(zé)任的落實(shí)，這是必不可少的。借助監(jiān)督系統(tǒng)，開展工務(wù)大修施工檢查，提供科學(xué)的質(zhì)量保障。需要的時(shí)候，每個(gè)工作面應(yīng)該有專門的人員負(fù)責(zé)，還有專門的人進(jìn)行監(jiān)督和管理。每個(gè)級別的管理人員，在自己負(fù)責(zé)的工作面內(nèi)開展監(jiān)督和管理工作，了解一線工作進(jìn)展情況。施工中要嚴(yán)格根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行，讓職工明確安全施工的重要性。另外，還理當(dāng)重視對職工風(fēng)險(xiǎn)辨識和防范能力的培養(yǎng)。
2.3強(qiáng)化安全教育培訓(xùn)
事故一旦發(fā)生了，就會(huì)導(dǎo)致?lián)p失的出現(xiàn)，但是要從事故中總結(jié)經(jīng)驗(yàn)吸收教訓(xùn)，定期開展安全教育活動(dòng)，有效避免事故的再次發(fā)生，通過安全教育活動(dòng)來增強(qiáng)一線職工的安全意識。定期對存在管理缺陷以及安全隱患缺陷的人員進(jìn)行安全教育，制定出科學(xué)的應(yīng)對方案，責(zé)任落實(shí)到人。崗前要進(jìn)行培訓(xùn)，強(qiáng)化職工的安全考核，安全教育工作不能停留在表面上，應(yīng)該落實(shí)到安全管理日程中，這是任職和頂崗之有效條件。每年都要舉行培訓(xùn)，培訓(xùn)最根本的目的是幫助施工人員獲得安全知識，增強(qiáng)安全意識，安全考試不合格的施工人員重新進(jìn)行培訓(xùn)。施工現(xiàn)場一般都是由施工單位統(tǒng)一制定，根據(jù)實(shí)際工程任務(wù)，對施工相關(guān)人員進(jìn)行安全教育培訓(xùn)。工務(wù)大修施工項(xiàng)目、材料以及工藝比較繁雜，每一工種對應(yīng)的施工技術(shù)要求都不同，每種工藝處理方式差異較大，因而施工過程中面臨的潛在風(fēng)險(xiǎn)因素也不盡相同。這就要求施工技術(shù)人員具備扎實(shí)的專業(yè)知識和超強(qiáng)的作業(yè)能力，在施工過程中及時(shí)發(fā)現(xiàn)潛在的風(fēng)險(xiǎn)，及時(shí)反饋匯總進(jìn)而對所有施工人員進(jìn)行施工安全教育。
3結(jié)語
1．1實(shí)驗(yàn)課較多，很多實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)到生物安全問題
《免疫學(xué)檢驗(yàn)》在本院?？漆t(yī)學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)專業(yè)的課時(shí)分配：總課時(shí)90節(jié)，理論48節(jié)，實(shí)驗(yàn)42節(jié)，幾乎是1∶1的比例。本院醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)專業(yè)開設(shè)的實(shí)驗(yàn)有：抗原抗體的制備（2節(jié)）、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)（4節(jié)）、凝集反應(yīng)（4節(jié)）、沉淀反應(yīng)（2學(xué)時(shí)）、血清總補(bǔ)體測定（2節(jié)）、免疫熒光技術(shù)（4節(jié)）、化學(xué)發(fā)光（4節(jié)）、免疫細(xì)胞分離技術(shù)（4節(jié)）、免疫細(xì)胞功能測定（6節(jié)）、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）（4節(jié)）、免疫病理實(shí)驗(yàn)（2節(jié)）、醫(yī)院免疫室見習(xí)（4節(jié)）。除了醫(yī)院免疫室見習(xí)外，其他每個(gè)實(shí)驗(yàn)都要學(xué)生自己動(dòng)手操作，這些實(shí)驗(yàn)中，不是要接觸細(xì)菌，就是要使用血清，或是接種實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，而這些標(biāo)本都是可能帶有極大生物危險(xiǎn)的感染性致病因子，不管是直接感染，還是因?yàn)橐恍┎僮饕蛩貙?dǎo)致的感染性致病因子間接的播散到環(huán)境中去，都會(huì)對動(dòng)物、植物、人類社會(huì)造成潛在的危險(xiǎn)。雖然在實(shí)驗(yàn)之前都對細(xì)菌、動(dòng)物、血清進(jìn)行了篩選，但是不可預(yù)知的生物危險(xiǎn)仍然存在。另外，《免疫學(xué)檢驗(yàn)》實(shí)驗(yàn)中還要經(jīng)常開啟橡膠瓶塞、離心、移液器吹打、去注射器針頭、混合震蕩等實(shí)驗(yàn)操作，都會(huì)導(dǎo)致氣溶膠產(chǎn)生，而實(shí)驗(yàn)室感染的最常見原因就是氣溶膠吸入。由此可見，《免疫學(xué)檢驗(yàn)》實(shí)驗(yàn)課中開設(shè)生物安全教育的意義非常大，也是十分必要的。
1．2學(xué)生生物安全意識淡薄，不重視生物安全
《免疫學(xué)檢驗(yàn)》和《微生物學(xué)檢驗(yàn)》這兩門課程是醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)專業(yè)的主干專業(yè)課，本院通常在第2年的第一學(xué)期同時(shí)開設(shè)這兩門課，在學(xué)生學(xué)習(xí)完免疫學(xué)基礎(chǔ)理論知識，進(jìn)入免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)室學(xué)習(xí)免疫學(xué)檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)技術(shù)時(shí)，微生物檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)技術(shù)的學(xué)習(xí)也還只在入門階段，對于生物安全還沒有什么概念，對一些潛在的生物危害因素，認(rèn)識不到位，尤其是對待血清標(biāo)本，學(xué)生認(rèn)為培養(yǎng)出來的，看得見的，比如一些致病菌可能是生物危險(xiǎn)因子，但是血清標(biāo)本里面那些看不見、潛在的生物危害因子，比如乙肝病毒往往被忽視，特別是同學(xué)之間相互檢測血清標(biāo)本時(shí)，不認(rèn)為自己同學(xué)的血清是可能帶有生物危險(xiǎn)因子的。因此，在《免疫學(xué)檢驗(yàn)》這門實(shí)驗(yàn)課中，體現(xiàn)的是在思想上，學(xué)生沒有自我保護(hù)意識或者意識淡薄。在行為上，對實(shí)驗(yàn)室的各種實(shí)驗(yàn)標(biāo)本看作普通東西，在實(shí)驗(yàn)操作的過程中沒有看到潛在的危險(xiǎn)因素，很容易忽視其在實(shí)驗(yàn)過程中可能產(chǎn)生的生物危害。
2探索《免疫學(xué)檢驗(yàn)》實(shí)驗(yàn)中的生物安全防護(hù)對策
2．1提高《免疫學(xué)檢驗(yàn)》實(shí)驗(yàn)教師的生物安全防護(hù)知識
首先要對《免疫學(xué)檢驗(yàn)》的實(shí)驗(yàn)教師進(jìn)行生物安全知識的培訓(xùn)。俗話說，給人一滴水，自己要有一桶水，要想使學(xué)生能夠很好地掌握相關(guān)的生物安全知識，具有生物安全防范意識，實(shí)驗(yàn)教師本人首先必須具備豐富的生物安全專業(yè)知識，并在思想上高度重視、在行為上起到榜樣作用。對衛(wèi)生部頒發(fā)的一些重要文件，比如《實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求》、《醫(yī)療廢物管理?xiàng)l例》等文件都應(yīng)該熟練掌握。
2．2加強(qiáng)學(xué)生生物安全防護(hù)知識的學(xué)習(xí)
學(xué)生通過什么途徑來學(xué)習(xí)生物安全知識，如何學(xué)習(xí)生物安全知識，是非常重要的。實(shí)驗(yàn)教師也應(yīng)該高度重視學(xué)生生物安全知識的學(xué)習(xí)問題，使學(xué)生從根本上認(rèn)識到生物安全防護(hù)的重要性，真正具備自我防護(hù)能力。由于學(xué)校沒有專門的生物安全課，所以可以根據(jù)學(xué)生的實(shí)際開課情況，采用多種方式學(xué)習(xí)，比如：專題講座，可以介紹社會(huì)、醫(yī)院等關(guān)于生物安全方面的一些突發(fā)事件和存在的一些典型案例。通過這些講座，可以使學(xué)生充分意識到生物安全防護(hù)知識對于檢驗(yàn)工作人員的重要性。其次還可以通過見習(xí)的方式進(jìn)行學(xué)習(xí)，比如，安排學(xué)生到醫(yī)院檢驗(yàn)科的免疫學(xué)檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室參觀，讓他們更直觀的學(xué)習(xí)到規(guī)范的生物安全防護(hù)方法。當(dāng)然，生物安全知識重要而寬泛，通過這些方式是遠(yuǎn)遠(yuǎn)不夠的，可以充分利用現(xiàn)在的網(wǎng)絡(luò)技術(shù)，把相關(guān)的，重要的生物安全知識上傳到系部網(wǎng)站，供學(xué)生自學(xué)。當(dāng)然，最重要的，也是最有效的學(xué)習(xí)方式就是進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室，通過教師的講解和示范進(jìn)行實(shí)踐學(xué)習(xí)?？傊箤W(xué)生能從多方面吸收生物安全防護(hù)知識，全面建立生物安全防護(hù)意識。
2．3加強(qiáng)學(xué)生的實(shí)驗(yàn)操作技術(shù)培訓(xùn)
（1）從最基本的生物安全防護(hù)知識入手：比如只要進(jìn)入免疫學(xué)檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室都必須穿工作服，強(qiáng)調(diào)離開實(shí)驗(yàn)室時(shí)一定要脫下工作服反折，這一點(diǎn)，如果不強(qiáng)調(diào)，往往很多學(xué)生，一到下課，直接脫下工作服就放書包了。強(qiáng)調(diào)工作服要經(jīng)常清洗消毒；實(shí)驗(yàn)完后消毒洗手；禁止吸煙、吃食物；保持桌面干凈整潔，傳染性物品放入消毒容器內(nèi)；如有菌材料濺出，應(yīng)報(bào)告教師及時(shí)做出適當(dāng)處理；在使用實(shí)驗(yàn)器材時(shí)一定要合理、規(guī)范。對在實(shí)驗(yàn)中需要的實(shí)驗(yàn)物品不準(zhǔn)隨意拋擲；對潛在的帶有生物危害的標(biāo)本都要進(jìn)行高壓蒸汽滅菌或是其他方法消毒后才能處理。（2）嚴(yán)格遵守實(shí)驗(yàn)操作規(guī)程。在免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)過程中產(chǎn)生的主要生物危害有：使用離心機(jī)離心、操作玻片凝集實(shí)驗(yàn)、對動(dòng)物進(jìn)行接種、用移液器吹打、去注射器針頭等所產(chǎn)生的氣溶膠吸入，而這些實(shí)驗(yàn)都是免疫學(xué)檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)中的常規(guī)實(shí)驗(yàn)，每一個(gè)學(xué)生都必須操作和掌握。除此以外，在實(shí)驗(yàn)過程中還可能遇到皮膚黏膜污染、被感染的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物咬傷、誤食，甚至可能被刺傷割傷等?？傊?，要求學(xué)生在實(shí)驗(yàn)過程中必須嚴(yán)格遵守生物安全有關(guān)規(guī)定，反復(fù)強(qiáng)調(diào)實(shí)驗(yàn)中的安全注意事項(xiàng)，對學(xué)生在操作過程中出現(xiàn)的問題及時(shí)指導(dǎo)和規(guī)范，避免任何意外事件發(fā)生的可能。
2．4加強(qiáng)《免疫學(xué)檢驗(yàn)》實(shí)驗(yàn)室生物安全管理體系的建設(shè)
本院在2008年成立了生物安全委員會(huì)，實(shí)驗(yàn)室也專門配備了一名生物安全員，落實(shí)到了生物安全管理責(zé)任制，教研室主任也定期組織教師學(xué)習(xí)生物安全的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)、政策與法規(guī)等，但主要是針對微生物檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室，雖然其生物安全管理制度不斷得到完善，但是免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)中的一些生物安全問題仍然沒有引起足夠的重視。所以，加強(qiáng)《免疫學(xué)檢驗(yàn)》實(shí)驗(yàn)室生物安全管理體系的建設(shè)十分必要。對免疫學(xué)檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)中的各個(gè)技術(shù)操作規(guī)程也要嚴(yán)格進(jìn)行規(guī)范，每次實(shí)驗(yàn)完畢進(jìn)行相關(guān)的記錄等。在實(shí)驗(yàn)室中，要規(guī)范各種標(biāo)識，使其時(shí)效性與警示作用得到保證。在發(fā)生緊急情況時(shí)的聯(lián)系電話，事故處理的流程應(yīng)張貼在明顯處等，使工作人員發(fā)生問題時(shí)，能及時(shí)找到處理問題的人?？傊瑢?shí)驗(yàn)室環(huán)境的井然有序，管理體系的完善建立，對初入免疫學(xué)檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室的檢驗(yàn)專業(yè)學(xué)生來說就是最好的示范，并有很強(qiáng)的警示作用。
2．5加強(qiáng)《免疫學(xué)檢驗(yàn)》實(shí)驗(yàn)室的清潔與消毒管理
1.1建立食品安全小組
動(dòng)物血制品加工企業(yè)在決定開展食品安全管理體系認(rèn)證時(shí)，首先要建立食品安全小組，食品安全小組成員應(yīng)具備多學(xué)科的知識和建立與實(shí)施動(dòng)物血制品加工食品安全管理體系的經(jīng)驗(yàn)，包括從事動(dòng)物血制品研發(fā)、工藝制定、原輔料采購、生產(chǎn)控制、質(zhì)量檢驗(yàn)控制、設(shè)備維護(hù)、倉儲(chǔ)運(yùn)輸、產(chǎn)品銷售等知識、技能或經(jīng)驗(yàn)。食品安全小組負(fù)責(zé)制定和修改食品安全管理體系文件，并監(jiān)督食品安全管理體系運(yùn)行情況，定期對于食品安全管理體系運(yùn)行情況進(jìn)行內(nèi)部審核，并采取糾偏措施。
1.2原輔料描述
食品安全小組應(yīng)對動(dòng)物血制品生產(chǎn)直接有關(guān)的原輔料進(jìn)行描述，描述內(nèi)容包括原輔料名稱、主要成分、來源、重要的特性、使用方法、包裝類型、儲(chǔ)存條件、保質(zhì)期、運(yùn)輸要求、接收原則。
1.3產(chǎn)品描述
食品安全小組應(yīng)制訂一份詳細(xì)的產(chǎn)品描述，描述內(nèi)容主要包括產(chǎn)品名稱、主要原輔料成分、成品特性、包裝方式、儲(chǔ)存條件、銷售方式、運(yùn)輸方式、使用方法、注意事項(xiàng)、使用的法律法規(guī)。應(yīng)當(dāng)對生產(chǎn)的各類動(dòng)物血制品分別做產(chǎn)品描述。
1.4制定動(dòng)物血制品工藝流程圖
工藝流程圖應(yīng)該由食品安全小組負(fù)責(zé)制定。該流程圖應(yīng)該包括從采集原料血到動(dòng)物血制品銷售整個(gè)過程中的所有環(huán)節(jié)。食品安全小組應(yīng)在工藝流程圖制定完成后，進(jìn)入生產(chǎn)現(xiàn)場確認(rèn)工藝流程圖上各步驟是和產(chǎn)品的整個(gè)生產(chǎn)過程相符合，并應(yīng)該根據(jù)流程圖對生產(chǎn)過程進(jìn)行逐一確認(rèn)，必要時(shí)對流程圖進(jìn)行修改。
1.5危害分析工作單
食品安全小組應(yīng)該列出動(dòng)物血制品加工過程中有可能發(fā)生危害的每一步工序，從原料血驗(yàn)收、輔料添加、生產(chǎn)過程、清洗消毒、包裝和運(yùn)輸。每一步工序中都要識別出所有可能存在或者受到的危害風(fēng)險(xiǎn)，包括生物性危害、化學(xué)性危害和物理性危害。從產(chǎn)生危害的可能性和嚴(yán)重性上對危害進(jìn)行分級評估，并根據(jù)評估的危害等級分別制定控制措施來預(yù)防或控制危害。必須要控制的最嚴(yán)重的危害要通過HACCP計(jì)劃來進(jìn)行控制。
1.6識別關(guān)鍵控制點(diǎn)(CCP)
關(guān)鍵控制點(diǎn)是指能夠進(jìn)行控制，并且該控制對防止、消除某一食品安全危害或?qū)⑵浣档偷娇山邮芩剿匦璧哪骋徊襟E。從動(dòng)物血制品生產(chǎn)工藝過程中分析原料血驗(yàn)收、輔料添加、噴霧干燥、過篩應(yīng)該做為CCP點(diǎn)列入HACCP計(jì)劃表，進(jìn)行嚴(yán)格監(jiān)控和控制。
1.7建立關(guān)鍵點(diǎn)控制限值
要為每個(gè)CCP確定各自的關(guān)鍵控制限值，并對其進(jìn)行驗(yàn)證。有時(shí)對某個(gè)工序可以確定多個(gè)控制限值。關(guān)鍵控制限值的確定應(yīng)以科學(xué)理論和試驗(yàn)為依據(jù)，遵循國家法律法規(guī)，參考學(xué)術(shù)研究成果、專業(yè)論文結(jié)論等。當(dāng)采用學(xué)術(shù)論文成果制定關(guān)鍵控制限值時(shí)，應(yīng)保證這些關(guān)鍵控制限值完全適用于動(dòng)物血制品的生產(chǎn)，并且可以檢測。動(dòng)物血制品加工關(guān)鍵控制限值的指標(biāo)主要包括原料血來源資質(zhì)證明文件、各種致病性微生物、禁用藥物殘留、儲(chǔ)存溫度，輔料添加量，噴霧干燥溫度和壓力，過篩包裝篩網(wǎng)孔徑和完整性。
1.8建立關(guān)鍵控制限值監(jiān)控體系
監(jiān)控是有計(jì)劃的對CCP的關(guān)鍵控制限值進(jìn)行檢查和測量。監(jiān)控程序必須能判斷CCP是否失去控制。而且，監(jiān)控最好能及時(shí)提供信息，以便及時(shí)進(jìn)行調(diào)整，控制生產(chǎn)，防止出現(xiàn)超出關(guān)鍵控制限值的情況發(fā)生。當(dāng)監(jiān)控顯示，CCP將要失去控制時(shí)，應(yīng)盡可能對生產(chǎn)進(jìn)行調(diào)整，調(diào)整必須在出現(xiàn)偏差之前完成。對監(jiān)控取得的數(shù)據(jù)的評估必須由具備相當(dāng)知識的，并有權(quán)采取糾正措施的人進(jìn)行。如果監(jiān)控不是連續(xù)進(jìn)行的，那么監(jiān)控次數(shù)或頻率要保證CCP是處于控制的范圍內(nèi)。
1.9建立糾正措施方案
在食品安全管理體系中針對每一個(gè)CCP，都必須制定當(dāng)偏差出現(xiàn)時(shí)所應(yīng)該采取的糾正措施方案。糾正措施必須確保能恢復(fù)對CCP的控制，并且必須包括合理地處理受影響的產(chǎn)品。偏差的情況和產(chǎn)品處理過程必須記錄到相應(yīng)的文件中。
1.10建立審核程序
食品安全小組必須建立審核程序，來確定食品安全管理體系是否在正確的運(yùn)轉(zhuǎn)，審核的頻率要足以確保HACCP體系是在有效的運(yùn)轉(zhuǎn)。驗(yàn)證應(yīng)由負(fù)責(zé)執(zhí)行監(jiān)控和糾正措施之外的人員來進(jìn)行。包括對管理體系文件和記錄的檢查；對出現(xiàn)的偏差及其相關(guān)產(chǎn)品的處理情況的檢查；確認(rèn)CCP是在控制之下。必要時(shí)，審核活動(dòng)應(yīng)包括驗(yàn)證食品安全管理體系諸要素的有效性。
1.11建立文件和記錄保存體系
保存有效和準(zhǔn)確的記錄對于管理體系的實(shí)施是至關(guān)重要的，管理體系的程序應(yīng)該形成文件。文件和記錄的管理應(yīng)當(dāng)與生產(chǎn)的規(guī)模和特點(diǎn)相適應(yīng)，并且能充分證明公司的管理體系是在有效運(yùn)行，并得到維護(hù)。
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